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嘔吐毒素檢測(cè)Detection of vomitoxin

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嘔吐毒素免疫親和柱

時(shí)間:2020-04-08來源:飛測(cè)生物點(diǎn)擊量:

  

  一、產(chǎn)品用途:

  嘔吐毒素免疫親和柱適合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析試劑盒結(jié)合使用,定量檢測(cè)DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測(cè)定。

  二、反應(yīng)原理:

  嘔吐毒素免疫親和柱產(chǎn)品測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),抗嘔吐毒素(DON)的單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上,樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱,在免疫親和柱內(nèi),DON與抗體結(jié)合,洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。最后采用甲醇洗脫DON,然后進(jìn)行相關(guān)分析。

嘔吐毒素免疫親和柱

  三、IAC性能:

  柱容量:≥2000ng

  四、注意事項(xiàng):

  (1)嘔吐毒素對(duì)人體有害,應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過夜。

  (2)不要使用過有效期的免疫親和柱。

  (3)免疫親和柱應(yīng)在2~8℃保存。不要冷凍。

  (4)使用前,免疫親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右)。

  (5)HPLC液相測(cè)定值、試劑盒計(jì)算值接近zui高檢出值時(shí),樣本的實(shí)際含量可能大于柱容量而造成流穿,建議減少上樣體積重新過柱。

  (6)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整,建議最低不少于10g樣。

  五、樣品制備

  ----準(zhǔn)確稱取25g(精確至0.01g)粉碎的樣品,加入5g聚乙二醇8000,并與125mL水混合,搖床振蕩提取15min;

  ----用快速定性濾紙過濾或4000r/min,離心5min;對(duì)于pH低于6.0的玉米加工副產(chǎn)物及飼料等的濾液或上清液,需要用5M NaOH調(diào)pH至7.0左右,并用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用;

  ----準(zhǔn)確移取2.5mL混勻?yàn)V液(相當(dāng)于0.5g樣品)過親和柱。

  六、親和柱凈化

  注意:整個(gè)純化過程盡量不要讓柱子干燥!

  ----3mL柱管取出上方堵頭,減去上堵頭螺紋下突出部分,插回柱子上,另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷,然后再插回柱子上(柱管內(nèi)偶見有小氣泡屬正?,F(xiàn)象,不影響親和柱的使用);

  ----準(zhǔn)確移取上述混勻?yàn)V液,注入針筒中,調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;

  ----用20mL 水沖洗柱子(對(duì)于飼料及玉米加工副產(chǎn)品等顏色較深的樣液,先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗,再用10 mL 10%甲醇-水沖洗柱子,最后用10mL水沖洗柱子。),流速1秒/滴,棄去流出液,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內(nèi)沒有殘余液體;

  ----準(zhǔn)確加入1.5mL甲醇(色譜級(jí))洗脫,流速自然重力,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內(nèi)沒有殘余液體。收集全部洗脫液,進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。

  七、操作流程圖示

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