黃曲霉毒素檢測(cè)方法介紹

      在當(dāng)今社會(huì)，食品安全受到人們的非常的關(guān)注和重視，尤其發(fā)生了三聚氰胺和地溝油等一系列的事件之后，人們更加的重視食品的安全問(wèn)題。黃曲霉毒素這類(lèi)真菌在世界不同地區(qū)都發(fā)現(xiàn)大量存在于食品中，它主要是由黃曲霉和寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的一類(lèi)有毒次生代謝物［1–2］。目前已知的黃曲霉毒素及其衍生物有 20 余種 , 即 B1，B2，B2a，G1，G2，G2a，M1，M2 等，黃曲霉毒素 B1 是其中毒性最大的一種，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其毒性是人們熟知的劇毒藥氰化鉀的 10 倍，是砒霜的 68 倍。黃曲霉毒素 B1 可誘發(fā)癌癥和皮下肉瘤，并且可使動(dòng)物的肝、腎、大腦和神經(jīng)系統(tǒng)等產(chǎn)生病變。自 20 世紀(jì) 60年代以來(lái)，有關(guān)黃曲霉毒素的危害被大量報(bào)道，以致黃曲霉毒素已成為最受人們關(guān)注的一種真菌毒素［3］。因此，尋求準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、價(jià)廉的檢測(cè)方法，對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行高效的定性定量分析，是黃曲霉毒素研究的一個(gè)重要方面。以下對(duì)黃曲霉毒素的檢測(cè)方法研究進(jìn)展進(jìn)行評(píng)述。
1、薄層色譜法
1.1薄層層析（TLC）法
TLC 法是測(cè)定黃曲霉毒素的經(jīng)典方法，在薄層板展開(kāi)后，在 365 nm 紫外燈下，黃曲霉毒素 B1，B2，G1 和 G2 分別顯示紫色、藍(lán)紫色、綠色和綠色熒光。TLC 法的特異性較差，靈敏度相對(duì)較差，且測(cè)定黃曲霉毒素專(zhuān)一性不夠，經(jīng)常引起測(cè)量誤差。但由于此法設(shè)備簡(jiǎn)單，易于普及，所以國(guó)內(nèi)外仍在使用。
1.2高效薄層（HPTLC）法
HPTLC 法［4–5］測(cè)定黃曲霉毒素采用目前國(guó)際上流行的樣品處理方法——固相萃取法（SPE）中針對(duì)真菌和病毒的多功能凈化（MFC）柱。采用 MFC 柱凈化后，僅用單相展開(kāi)即可達(dá)到分離測(cè)定的目的，不僅節(jié)省了工作時(shí)間，提高了工作效率，而且進(jìn)一步減少了有毒有害溶劑的用量。Stroka 等［6］將免疫親合柱凈化應(yīng)用于 TLC 法測(cè)定，進(jìn)行單相展開(kāi)并用熒光密度計(jì)定量，此方法能檢測(cè)含量明顯低于當(dāng)前歐盟標(biāo)準(zhǔn)的黃曲霉毒素。Kamimura 等［7］用HPTLC 方法測(cè)定玉米、花生、蕎麥等樣品，并與通過(guò)公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）認(rèn)證的分析花生及花生制品中黃曲霉素的官方方法 CB（Contamination Branch）法和 BF（Best Foods）法進(jìn)行比較，4 種主要黃曲霉毒素的檢測(cè)限均不高于 0.2 μg／kg，回收率與 CB 法一樣均高于 BF 法。
1.3高壓薄層色譜（OPTLC）法
高壓薄層色譜于 1979 年由 Tyihak 提出［8］，它結(jié)合了經(jīng)典薄層色譜法、高效薄層色譜法與高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)，是一種能夠提高薄層分離效率的平面液相色譜技術(shù)。隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷成熟，OPTLC 法在飼料和食物中黃曲霉毒素的檢測(cè)方面的應(yīng)用越來(lái)越多。Eszter Papp 等［9］發(fā)展了一系列適合檢測(cè)玉米和小麥中黃曲霉毒素的 OPTLC 方法。
2、高效液相色譜（HPLC）法
由于具有穩(wěn)定、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，HPLC 法已成為當(dāng)前進(jìn)行黃曲霉毒素定量研究的首選方法。分析黃曲霉毒素的液相色譜方法包括正相液相色譜方法（NPLC）和反相液相色譜方法（RPLC）。反相高效液相色譜 (RP－HPLC) 系統(tǒng)易操作，流動(dòng)相具有低毒性，可同時(shí)分離、分析樣品中黃曲霉毒素B1，B2，G1，G2且不受樣品沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性、和分子量限制，所以目前使用熒光檢測(cè)器的反相HPLC 法已經(jīng)成為檢測(cè)黃曲霉毒素的主要測(cè)定方法［10］。

Chiavaro 等［11］根據(jù)不同環(huán)式糊精增強(qiáng)黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、M1 熒光釋放的不同效果，發(fā)展了將環(huán)式糊精加入到流動(dòng)相中的高效液相色譜法，黃曲霉毒素 B1，B2，G1，G2 的檢測(cè)限均在 0.3 μg／kg 以下，M1 的檢測(cè)限在 0.000 5 
μg／kg 以下，幾種黃曲霉毒素都呈線(xiàn)性反應(yīng)關(guān)系。這種方法也被用于測(cè)定自然污染及人工添加樣品。
3、免疫學(xué)方法
黃曲霉毒素的免疫學(xué)檢測(cè)方法是將生物大分子的免疫學(xué)特性與化學(xué)特性結(jié)合起來(lái)的檢測(cè)方法。該方法具有快速、靈敏、對(duì)樣品純度要求不高的特點(diǎn)，特別適合于大批量樣本的檢測(cè)。用于檢測(cè)黃曲霉毒素的免疫學(xué)方法有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法、放射免疫測(cè)定法、親和層析法、熒光偏振免疫測(cè)定法及免疫層析法。
3.1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA) 法
ELISA 法是在免疫學(xué)和細(xì)胞工程學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展出來(lái)的一種微量檢測(cè)技術(shù)，分為直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法，其優(yōu)點(diǎn)是對(duì)黃曲霉毒素 B1 的檢測(cè)定性定量準(zhǔn)確而且檢測(cè)速度快（比薄層法提高了近 200 倍）［12］，特異性強(qiáng)，熒光物質(zhì)、色素、結(jié)構(gòu)類(lèi)似物對(duì)結(jié)果無(wú)干擾，回收率高，提取方法簡(jiǎn)單，成本較低，特別適合于對(duì)黃曲霉毒素 Bl 污染監(jiān)測(cè)控制中大量樣品的篩查［13–14］。缺點(diǎn)是 ELISA 法中酶的活性易受反應(yīng)條件影響，測(cè)定結(jié)果重復(fù)性較差，測(cè)定結(jié)果易出現(xiàn)假陽(yáng)性問(wèn)題；此外 ELISA 試劑壽命短，需要低溫保存，葡萄酒類(lèi)、含鹽量高的醬油、含脂量高的花生油在提取時(shí)要進(jìn)行調(diào)節(jié)pH 值、脫鹽、脫脂等特殊處理。
3.2親和層析法
親和層析法利用免疫化學(xué)反應(yīng)原理，采用大劑量的單克隆抗體，選擇性吸附提取液中的抗原物質(zhì)黃曲霉毒素。由于抗原 – 抗體反應(yīng)具有高靈敏、高選擇、高特異性等特點(diǎn)，從而大大提高了試樣的凈化效果及檢測(cè)靈敏度，同時(shí)可顯著減少有毒有害試劑的使用，有利于操作人員的身體健康和環(huán)境保護(hù)。
3.3放射免疫 (RIA) 法
RIA 法與 ELISA 法基本相似，不同的是它們所使用的標(biāo)記物不同，ELISA 法的標(biāo)記物為酶，RIA 法所用的標(biāo)記物一般為放射性元素氚 (3H)。該方法是將毒素 –3H 標(biāo)記物與樣品加抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，除去未結(jié)合的部分，測(cè)定其放射性，放射性強(qiáng)則說(shuō)明樣品中毒素含量低，反之毒素含量高［15］。實(shí)驗(yàn)證明 ELISA 比 RIA 靈敏度更高且更簡(jiǎn)便，并且RIA 需要特殊設(shè)備，有放射性元素污染問(wèn)題，人員需要安全防護(hù)，現(xiàn)在已經(jīng)很少使用。
3.4熒光偏振免疫測(cè)定法
熒光偏振免疫測(cè)定法的主要原理是熒光標(biāo)記的毒素在樣品緩沖液中與未熒光標(biāo)記的毒素對(duì)特異性抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。分子質(zhì)量越大，分子旋轉(zhuǎn)速度越慢，熒光偏振值越大。Nasir 等［16］報(bào)道了用基于熒光偏振的裝置檢測(cè)不同谷物中的黃曲霉毒素。
3.5免疫層析（IC）法
IC 法是 20 世紀(jì) 80 年代初發(fā)展起來(lái)的一種快速免疫分析技術(shù)，其操作簡(jiǎn)單，快速，人員不用培訓(xùn)，且不需特殊的儀器設(shè)備，非常適用于現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試和進(jìn)行大量樣品的初篩［17］。
4、免疫學(xué)與儀器結(jié)合方法
近年來(lái)，隨著黃曲霉毒素在食品中的檢出標(biāo)準(zhǔn)越來(lái)越嚴(yán)格，很多人采取了免疫學(xué)與儀器結(jié)合的方法來(lái)檢測(cè)黃曲霉毒素，發(fā)展了黃曲霉毒素的檢測(cè)方法。
4.1免疫親和柱凈化熒光光度法
張藝兵等［18］提出了一種以免疫親和柱凈化結(jié)合熒光光度法檢測(cè)黃曲霉毒素的新方法，此法利用抗原抗體——對(duì)應(yīng)的特異吸附特性，以黃曲霉毒素單克隆抗體為填充柱，特異性、選擇性地吸附黃曲霉毒素，再以甲醇為流動(dòng)相將結(jié)合的黃曲霉毒素洗脫下來(lái)然后通過(guò)溴溶液衍生，所得衍生物可發(fā)射熒光，再通過(guò)熒光光度計(jì)分析即可以測(cè)定毒素含量。此方法克服了 TLC 法和 HPLC 法在操作過(guò)程中使用劇毒的真菌毒素作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物和在樣品預(yù)處理過(guò)程中使用多種有毒、有異味的有機(jī)溶劑對(duì)操作人員造成身體傷害和污染環(huán)境的缺點(diǎn)，所需儀器設(shè)備輕便易攜帶，自動(dòng)化程度高，操作簡(jiǎn)單，靈敏度可達(dá) 1 μg／kg，回收率在 85％以上。一個(gè)樣品只需10～15 min 便能直接讀出測(cè)試結(jié)果，比傳統(tǒng)方法快幾個(gè)小時(shí)甚至幾天時(shí)間。缺點(diǎn)是此法只能測(cè)定黃曲霉毒素的總量且對(duì)試劑要求比較高，檢測(cè)中藥材黃曲霉毒素的含量時(shí)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)一些假陽(yáng)性。
4.2免疫親和柱高效液相色譜法
免疫親和柱（IAC）是將特異性的黃曲霉毒素單克隆抗體與載體蛋白偶聯(lián)并填柱而成。由于抗原抗體有一一對(duì)應(yīng)的特異性吸附關(guān)系，所以 IAC 能特效性地、高選擇性地吸附黃曲霉毒素，而讓其它雜質(zhì)通過(guò)柱子，使樣品得以純化，吸附的黃曲霉毒素可以被極性有機(jī)溶劑洗脫，再用 HPLC 法進(jìn)行定量檢測(cè)［19］，其優(yōu)點(diǎn)是具有高度特異性，可除去絕大多數(shù)干擾物質(zhì)，檢測(cè)限達(dá) 1 ng／g，還具有快速、溶劑使用少、可以自動(dòng)化和再生利用的特點(diǎn)。缺點(diǎn)是柱成本高，商品化 IAC 僅適合幾種毒素，有時(shí)需要加預(yù)柱凈化。
4.3多功能凈化柱高效液相色譜法
Wilson 和 Romer［20］開(kāi)發(fā)了獨(dú)特的真菌毒素多功能凈化 (MFC) 柱，MFC 柱提供一種快速的一步萃取純化方法，工作原理和操作過(guò)程與其它凈化柱相反，它含有親脂性 ( 非極性 ) 和電荷活性成分 ( 極性 )，當(dāng)樣品提取液通過(guò)柱時(shí)，MFC柱保留樣品液中的干擾物質(zhì)如脂肪、蛋白質(zhì)類(lèi)化合物和碳水化合物等，而待測(cè)組分黃曲霉毒素不被吸附而直接通過(guò)，從而一步完成凈化過(guò)程，除去 90％的雜質(zhì)，減少了傳統(tǒng)凈化方式淋洗雜質(zhì)和洗脫待測(cè)樣品的步驟，從而達(dá)到凈化目的，這一點(diǎn)是 IAC 和普通 SPE 凈化柱所不具備的，并且與 IAC 相比凈化效果同樣理想，回收率高，靈敏度高，檢測(cè)限低。
5、超光譜（HS）法
一直以來(lái)，黃曲霉毒素的檢測(cè)都用化學(xué)方法，并且有些化學(xué)方法的檢測(cè)結(jié)果非常準(zhǔn)確，但是化學(xué)方法都要耗費(fèi)大量的檢測(cè)時(shí)間，檢測(cè)費(fèi)用較高且損壞檢測(cè)樣品，所以研究一種快速、準(zhǔn)確、無(wú)損樣品的檢測(cè)方法對(duì)糧食產(chǎn)業(yè)是至關(guān)重要的，超光譜法檢測(cè)黃曲霉毒就是這樣一種方法。它的原理是首先通過(guò)光源激發(fā)待測(cè)樣品，再通過(guò)設(shè)備捕捉成像，然后對(duì)成像進(jìn)行特征抽取和特征排列，最后實(shí)現(xiàn)區(qū)別受黃曲霉毒素污染和未受黃曲霉毒素污染的樣品。
Haibo Yao［21］等利用超光譜法分析了長(zhǎng)波紫外線(xiàn)激發(fā)下的玉米粒的光譜 BGYF 響應(yīng)，首先用中心激發(fā)波長(zhǎng)為 365 nm 的紫外線(xiàn)光照射檢測(cè)樣品，被檢測(cè)到黃綠色熒光的玉米粒，手動(dòng)挑選出來(lái)，結(jié)果顯示，在 500～515 nm 波長(zhǎng)范圍具有較強(qiáng)的黃綠色熒光發(fā)射光譜峰，選取 500～515 nm 有較強(qiáng)黃綠色熒光的玉米粒作為陽(yáng)性組，用高效液相色譜法測(cè)定，與正常組對(duì)比，呈黃綠色熒光成像的黃曲霉毒素濃度的平均水平濃度是 5.114 μg／g。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證明了玉米只有在感染黃曲霉毒素多的時(shí)候才會(huì)發(fā)出黃綠色熒光，所以根據(jù) BGYF 測(cè)量黃曲霉毒素的含量是不準(zhǔn)確的。
Haibo Yao 等［22］還發(fā)現(xiàn)感染黃曲霉毒素的玉米會(huì)發(fā)生峰偏移現(xiàn)象，受黃曲霉毒素感染高的玉米粒其光譜峰會(huì)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)，未受感染或者感染率低的玉米粒光譜峰會(huì)向短波方向移動(dòng)，并且受黃曲霉毒素感染高的玉米粒比未受感染的玉米粒光譜峰強(qiáng)度低。使用超光譜法和光譜角度映射分類(lèi)法對(duì)樣品測(cè)試，樣品熒光強(qiáng)度不敏感但對(duì)峰的變化敏感［23］，對(duì)待測(cè)玉米以 20，100 ng／g 為臨界值做檢測(cè)，分類(lèi)精度為 86％時(shí)有 15％的假陽(yáng)性率，88％時(shí)有 16％的假陽(yáng)性率，結(jié)果表明，超光譜法和光譜角度映射分類(lèi)法可以對(duì)感染與非感染玉米進(jìn)行分類(lèi)。
Haibo Yao 等［24］用中心波長(zhǎng)為 365 nm 的紫外光激發(fā)待測(cè)玉米，用最大相似率和二進(jìn)制編碼兩種算法分別對(duì)臨界值為20，100 ng／g 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并與 HPLC 檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)二進(jìn)制編碼比最大相似率分類(lèi)精確，20 ng／g 和 100 ng／g 的分類(lèi)精度分別為 87%，88%。
Pearson 等［25］發(fā)現(xiàn)在 BGYF 光很弱的時(shí)候利用該檢測(cè)系統(tǒng)無(wú)法檢測(cè)到 BGYF。他用一個(gè)硅光電二極管光纖光譜儀通過(guò)辨別分析，利用光的反射比從含量小于 10 ng／g 或者沒(méi)有被污染的玉米中檢測(cè)出受黃曲霉毒素污染大于 100 ng／g 的玉米，分類(lèi)精度達(dá)到 96.6%。
Kalkan 等［26］在 365 nm 的紫外燈下分析了 285 個(gè)榛子樣品，在 440～450 nm 該鑒別能力最強(qiáng)的譜帶分類(lèi)精度達(dá)到 90%。Musa Ata 等［27］用超光譜法對(duì)紅辣椒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選擇鹵素?zé)艉妥贤夤鈨煞N光源進(jìn)行對(duì)比，在對(duì)成像進(jìn)行特征抽取時(shí)分為單獨(dú)頻帶能量特征和連續(xù)絕對(duì)差異光譜波段能量?jī)煞N，在成像的特征排列中用了最低冗余和最大相關(guān)性（mRMR）及多層感知器連接權(quán)重（MLP），并對(duì)單獨(dú)頻帶能量特征和連續(xù)差異光譜波段能量使用了量子直方圖矩陣方法，并與 HPLC 檢測(cè)結(jié)果做了對(duì)比，最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明光源采用鹵素?zé)?、特征排列方法采用MLP 法的分類(lèi)精度最高（達(dá) 91%）。Haibo Yao 等［28］研究了窄頻帶光譜指數(shù)加速檢測(cè)黃曲霉毒素的方法，原先因?yàn)槭艿桨l(fā)射響應(yīng)的限制，成像的強(qiáng)度位準(zhǔn)比較低，全部的檢測(cè)結(jié)果持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)，而窄頻帶光譜可以使這種情況得到改善。首先用歸一化差異熒光指數(shù)（NDFI）、差異化指數(shù)（DFI）、熒光率指數(shù)（FRI）3 個(gè)指數(shù)與多譜線(xiàn)成像系統(tǒng)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)系統(tǒng)的 NDFI 指數(shù)有最好的相關(guān)性，然后用窄頻帶光譜對(duì)25 g 和 1 kg 的樣品分別做了臨界值為 20，100 ng／g 的實(shí)驗(yàn)，并與 HPLC 進(jìn)行比較。25 g 樣品 20，100 ng／g 的分類(lèi)精度為 83.33%，85.26% ；1 kg 樣品 20，100 ng／g 的分類(lèi)精度為69.23%，95.73%。6針對(duì)黃曲霉毒素 B1 的快速檢測(cè)方法因?yàn)辄S曲霉毒素 B1 是黃曲霉毒素中毒性最強(qiáng)的，所以隨著對(duì)黃曲霉毒素研究的深入，產(chǎn)生了很多對(duì)其快速檢測(cè)的方法。
6.1免疫親和微柱檢測(cè)法
免疫親和微柱檢測(cè)法的原理是試樣提取液經(jīng)過(guò)濾、稀釋后，通過(guò)黃曲霉毒素 B1 免疫親和柱。黃曲霉毒素 B1 免疫親和柱是由偶聯(lián)有黃曲霉毒素 B1 抗體的免疫親和微球填充而成的，而此抗體對(duì)黃曲霉毒素 B1 具有專(zhuān)一性，樣液中黃曲霉毒素 B1 被抗體捕獲，雜質(zhì)隨洗滌液流出微柱，再以甲醇將黃曲霉毒素 B1 洗脫，洗脫液采用熒光光度法根據(jù)黃曲霉毒素 B1 檢測(cè)工作曲線(xiàn)測(cè)定黃曲霉毒素 B1 的含量。朱劍［29］等用免疫親和微柱法對(duì)大米，油脂，玉米粉做了黃曲霉毒素的檢測(cè)并與酶聯(lián)免疫吸附法作了比較，發(fā)現(xiàn)兩種檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和靈敏度都比較高，免疫親和微柱法比ELISA 的重復(fù)性好，對(duì)植物油中黃曲霉毒素 B1 含量檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。ELISA 一次可以檢測(cè)多個(gè)樣本，適于大批量樣 黃潔：黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展 103品快速篩選，免疫親和微柱法一次只能檢測(cè)一個(gè)樣本，適于單一樣品現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，都比較適合基層實(shí)驗(yàn)室推廣使用。
6.2一步式金標(biāo)試紙法
金標(biāo)免疫層析 (GICA) 是 20 世紀(jì) 80 年代初發(fā)展起來(lái)的一種快速免疫診斷技術(shù)。一步式黃曲霉毒素檢測(cè)金標(biāo)試紙法是利用單克隆抗體而設(shè)計(jì)的固相免疫分析法，快速檢測(cè)試紙利用納米金作為標(biāo)記物，可在 5～10 min 完成對(duì)樣品中黃曲霉毒素的定性測(cè)定。它不需進(jìn)行結(jié)合標(biāo)記物與自由標(biāo)記物的分離，省去了繁瑣的加樣、洗滌步驟，不僅提高了檢測(cè)速度，而且檢測(cè)過(guò)程中無(wú)需處理試劑，真正實(shí)現(xiàn)了一步式檢測(cè)［30］。
Zhang 等［31］利用一步式金標(biāo)試紙法分析一個(gè)樣品，用時(shí)不到 10 min。在金標(biāo)免疫試紙法的應(yīng)用過(guò)程中，孫秀蘭等［32］研究了樣品基質(zhì)對(duì)試紙條信號(hào)靈敏度的影響，為消除這些影響提供了經(jīng)驗(yàn)。
鄧省亮等［33］用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金顆粒，標(biāo)記為抗黃曲霉毒素 B1。單克隆抗體并噴于玻璃纖維上，黃曲霉毒素 B1 偶聯(lián)抗原和二抗分別結(jié)合于硝酸纖維膜上，依次將樣本墊、膠金墊、硝酸纖維膜和吸水紙組裝切割成膠體金試紙條并裝入檢測(cè)卡中。測(cè)試結(jié)果表明，黃曲霉毒素 B1 快速檢測(cè)試紙條的靈敏度為 5 ng／mL，檢測(cè)時(shí)間為 10 min，批內(nèi)和批間重復(fù)性 100%，假陽(yáng)性率和假陰性率均為 0。
6.3時(shí)間分辨熒光免疫分析法 (TRFIA)
TRFIA 是超微量檢測(cè)中一項(xiàng)新興檢測(cè)技術(shù)，靈敏度較放射免疫分析 (RIA) 高出 3 個(gè)數(shù)量級(jí)。TRFIA 原理與 ELISA一致，不同的是 TRFIA 采用了一種特殊的標(biāo)記物，即 3 價(jià)稀土離子 (Eu3+，Tb3+等 ) 代替酶標(biāo)記物或其它熒光物，用時(shí)間分辨熒光儀測(cè)定產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度，從而判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度，達(dá)到定量分析的目的。TRFIA 利用稀土元素?zé)晒獠ㄩL(zhǎng)與其激發(fā)波長(zhǎng)的巨大差異克服了普通紫外－可見(jiàn)分光分析法中雜色光的影響，可大幅度提高分析的靈敏度。黃飚等［34］采用自制黃曲霉毒素 B1 全抗原和多克隆抗體，構(gòu)建了一套較為完整的黃曲霉毒素 B1－TRFIA 檢測(cè)平臺(tái)，具有較好的分析穩(wěn)定性，靈敏度達(dá)到 0.003 9 μg／L，線(xiàn)性范圍 0.003 9～100 μg／L。靈敏度和測(cè)量范圍均超越了市場(chǎng)上常用的進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑 ( 分別為 0.1 μg／L 和0.1～10 μg／L)，經(jīng)過(guò)多方面考核，各項(xiàng)指標(biāo)符合標(biāo)記免疫試劑的要求，對(duì)食品、飼料等樣本檢測(cè)效果均佳，具有很好的應(yīng)用前景。
7、結(jié)語(yǔ)
綜上所述，黃曲霉毒素具有高的致癌、致畸性，因而受到全世界的廣泛關(guān)注。在人們對(duì)食品安全的意識(shí)不斷提高的今天，加強(qiáng)對(duì)黃曲霉毒素的監(jiān)控和檢測(cè)非常必要?？v觀(guān)其發(fā)展趨勢(shì)，主要有兩個(gè)發(fā)展方向，即對(duì)現(xiàn)有方法的改進(jìn)和新方法的開(kāi)發(fā)。常用的檢測(cè)黃曲霉毒素的方法，即薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法及高效液相色譜法，因檢測(cè)速度慢、精確度低、檢測(cè)費(fèi)用高等原因而影響了對(duì)黃曲霉毒素監(jiān)控的廣泛性及檢測(cè)的即時(shí)性，需要加以改進(jìn)。傳統(tǒng)檢測(cè)方法的不足促使黃曲霉毒素快速、準(zhǔn)確檢測(cè)方法的研發(fā)，例如超光譜法，它是一種無(wú)侵入性，無(wú)損性，快速、準(zhǔn)確檢測(cè)黃曲霉毒素的新方法，已經(jīng)使用它對(duì)花生，玉米，辣椒，堅(jiān)果類(lèi)等進(jìn)行了黃曲霉毒素的檢測(cè)，并且準(zhǔn)確度較高，是以后發(fā)展的方向；還有像電子鼻法、生物傳感器等方法還不完善，需要改進(jìn)，未來(lái)這些方法的發(fā)展會(huì)使快速、準(zhǔn)確、安全的檢測(cè)黃曲霉毒素成為可能。

       上海飛測(cè)生物基于全球領(lǐng)先的時(shí)間分辨熒光定量POCT檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)，推出了黃曲霉毒素B1快速定量檢測(cè)儀和黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測(cè)卡，以可在10min內(nèi)快速準(zhǔn)確定量的測(cè)定各種糧食谷物、油料作物、植物油、飼料原料及部分飼料中黃曲霉毒素B1的含量，樣品前處理簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，采用熒光讀數(shù)儀讀數(shù)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于各類(lèi)糧食、糧油、飼料加工企業(yè)、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)及各級(jí)政府監(jiān)管部門(mén)。

操作視頻地址：http://v.youku.com/v_show/id_XMTcyMTU4NTMzMg==.html

1、 靈敏度：0.5ng/mL；
2、 定量線(xiàn)性范圍：1.0ng/mL - 50.0 ng/mL；

3、樣品前處理時(shí)間：8min；

4、檢測(cè)時(shí)間：10min；
5、準(zhǔn)確度：添加回收率為80%-125%；
6、 特異性：在1000 ng/mL濃度水平下與其它真菌毒素?zé)o交叉反應(yīng)；

二、黃曲霉毒素B1熒光定量檢測(cè)卡檢測(cè)流程示意圖   

三、黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)儀結(jié)果判讀和輸出
      黃曲霉素B1熒光定量檢測(cè)卡采用便攜式熒光免疫分析儀進(jìn)行讀數(shù)，使得檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確、客觀(guān)，避免人為的誤判。

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