小麥中嘔吐毒素（DON）熒光定量8min快速檢測系統(tǒng)，國糧局權威驗證

一、嘔吐毒素危害及檢測方法介紹

    嘔吐毒素，學名脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)，是單端孢菌素烯烴中的一種，其通常是由生長在谷類物品(如小麥、玉米、大麥和秣草)霉菌鐮紅菌素生成的。近年來發(fā)現(xiàn)，嘔吐毒素DON可能與人類的食管癌、IgA腎病有關。人畜攝入了被DON污染的食物／飼料后，會出現(xiàn)厭食、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)、反應變得遲鈍等急性中毒的癥狀，嚴重時可損害造血系統(tǒng)造成死亡。研究表明，DON可能對免疫系統(tǒng)有嚴重的影響，有明顯的胚胎毒性和一定的致畸作用，可能有遺傳毒性，但無致癌、致突變作用。由于DON的嚴重影響，引起了各國的普遍重視。

    嘔吐毒素作為一種常見的真菌毒素，在自然界中廣泛存在于小麥等糧谷類農(nóng)作物中，在世界范圍內(nèi)存在著較高的污染率，小麥一旦被嘔吐毒素產(chǎn)毒菌株污染，在適宜生長環(huán)境（水分活度 Aw>0. 87）中，產(chǎn)毒菌株會迅速生長，產(chǎn)生嘔吐毒素，而小麥中的嘔吐毒素又會隨小麥粉的生產(chǎn)過程帶入到面粉中，嚴重威脅人體健康。我國 2013 年國家風險監(jiān)測計劃已將小麥和面粉中嘔吐毒素含量的監(jiān)測列為重點。

目前嘔吐毒素的檢測方法主要分為兩大類：即確認方法和快速方法。確認方法主要基于理化儀器設備，如薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、高壓液相色譜法(HPLC)和各種聯(lián)用技術如氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)、液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)等；快速方法主要是基于免疫化學基礎上的免疫分析方法如免疫親合柱-熒光檢測(IAC-FLD)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELlSA)和膠體金免疫層析法等。

結果準確、法定認可是理化方法最大的優(yōu)點，但是儀器設備價格昂貴，前處理過程復雜、操作繁瑣、效率低，成本極高，因此不適用于大規(guī)模樣本的篩查和日常的內(nèi)控檢測，一般僅用于最終的確證。酶聯(lián)免疫吸附法ELISA 方法和膠體金快速檢測卡是企業(yè)常用的快速檢測方法，但也均存在各自的優(yōu)缺點：ELISA 方法能靈敏度相對較高，且能定量檢測，但操作過程相對復雜，對環(huán)境和人員要求高，環(huán)境干擾因素復雜，重復性較差；膠體金檢測卡可以滿足現(xiàn)場快速的要求，能在5-10min內(nèi)快速測定，但是只能定性，且靈敏度較低，肉眼觀察主觀性較強，重復性差。

二、小麥和面粉中嘔吐毒素國家殘留限量標準

引自：《GB 2761-2011 食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》。

三、上海飛測小麥中嘔吐毒素熒光定量快速檢測系統(tǒng)

    上海飛測生物基于熒光定量FPOCT技術平臺，開發(fā)了嘔吐毒素熒光定量快速檢測系統(tǒng)，該系統(tǒng)結合了膠體金快速、酶聯(lián)免疫定量以及色譜法準確的特點，可在8min內(nèi)快速準確定量的測定出大麥、小麥中的嘔吐毒素的含量，樣品前處理簡單（僅需7min），操作簡便，只需一步加樣，無需標準品，無需做標準曲線，采用熒光免疫定量分析儀讀數(shù)，結果準確可靠且可現(xiàn)場打印，準確性高度符合HPLC法的檢測結果，為嘔吐毒素的快速檢測和控制提供了一種全新的技術手段，適用于各類小麥收儲、加工企業(yè)、檢測機構及政府相關監(jiān)管部門。

3.1.嘔吐毒素熒光定量檢測試紙條性能

?檢測靈敏度：25μg/kg；

?定量線性范圍：100μg/kg - 5000μg/kg；

?樣品前處理時間：7min；

?檢測時間：8min；

?準確度：回收率為80%-125%；

?特異性：在10000μg/kg濃度水平下與其它真菌毒素無交叉反應；

3.2.樣品前處理過程

1、粉碎；

2、振蕩提取（5min）；

3、離心（2min）；

3.3.檢測操作過程

1、稀釋；

2、加樣反應（8min）；

3、讀數(shù)，打印檢測報告；

檢測操作視頻地址：http://v.youku.com/v_show/id_XMjg0NjY5MzUwOA==.html

3.4.結果判讀和輸出

    采用便攜式嘔吐毒素熒光定量檢測儀進行讀數(shù)，檢測結果更加準確、客觀，避免人為的誤判。

    檢測結果將呈現(xiàn)于熒光讀數(shù)儀液晶顯示屏上，同時可按打印鍵打印獲得紙質(zhì)的檢測報告，另外，開通儀器的WIFI數(shù)據(jù)上傳功能后，檢測相關數(shù)據(jù)信息將自動上傳至“食品安全溯源管理云平臺”，便于溯源及質(zhì)量管理。

           

3.5.上海飛測熒光定量FPOCT技術平臺與其他方法學技術性能的對比

3.6.上海飛測嘔吐毒素熒光定量快速檢測方法優(yōu)點

8min快速準確定量檢測：集膠體金快速檢測、酶聯(lián)免疫定量檢測、色譜質(zhì)譜準確檢測的特點于一身，可在8min內(nèi)實現(xiàn)嘔吐毒素的快速準確定量測定；

內(nèi)置定量標準曲線：儀器內(nèi)置標準曲線，無需使用標準品，無需檢測時再做標準曲線，既節(jié)省了成本，也避免了操作人員與嘔吐毒素的接觸，保護操作人員的安全；

行標支持，國糧局權威驗證：基于行業(yè)標準LST6113-2015，并通過國糧局及農(nóng)科院的權威驗證；

樣品前處理簡單：前處理方法簡單快速，無需對提取液進行pH的調(diào)節(jié)，大大提升檢測的便捷性和檢測效率；

隨到隨檢：無需做標準曲線，對檢測樣本量無要求，既可單個或少量樣本隨到隨檢，也可大量樣本同時檢測，檢測成本無區(qū)別；既可用于實驗室常規(guī)質(zhì)控檢測，也可用于收糧現(xiàn)場檢測，確保原料收購的質(zhì)量；

操作簡便：對配套的儀器設備和檢測人員要求低，操作人員僅需短期培訓就能熟練掌握；

樣本適用范圍廣：采用時間分辨熒光專利技術，抗基質(zhì)干擾強，樣本適用性廣，既可檢測小麥、玉米、大米等原糧，也可檢測各種粕類、麩皮、DDGS等飼料原料，還可檢測花生油、玉米油等各種植物油；

遠程網(wǎng)絡支持：儀器可通過網(wǎng)絡自動進行標準曲線讀取、軟件升級、問題故障診斷、質(zhì)量控制等；

數(shù)據(jù)上傳及溯源管理：熒光定量分析儀具備數(shù)據(jù)無線上傳的功能，可根據(jù)客戶的需求定制開發(fā)相應的數(shù)據(jù)管理和溯源管理系統(tǒng)，實現(xiàn)公司總部對各分公司、上級監(jiān)管部門對下級監(jiān)管部門或者監(jiān)管部門對各監(jiān)管對象檢測數(shù)據(jù)的實時掌握和分析；

性價比高：花進口設備三分之一的價格，獲得色譜檢測的質(zhì)量和結果，并且節(jié)省人力物力，大幅降低檢測費用；

FD-100型嘔吐毒素熒光定量檢測儀基本參數(shù)及性能

1、儀器尺寸：210mm×197mm×84mm ，觸屏尺寸：3.5英寸，重量：約1kg，輕巧便攜，體積精巧，既適合實驗室操作，也適合現(xiàn)場操作；

2、激發(fā)光源采用LED，激發(fā)光譜波長λ0=365nm，接收光譜波長λ1=610nm；并且具有時間分辨熒光功能，讀數(shù)時間為200us-600us，提高檢測的準確度和特異性；

3、測量重復性：臺內(nèi)精密度CV≤1.0%；臺間精密度CV≤1.5%；儀器信噪比：0.01%

4、內(nèi)置標準曲線，通過ID卡導入標準曲線，不需要現(xiàn)場定標；

5、通過儀器內(nèi)置光電掃描儀掃描條形碼切換不同檢測項目和批號，檢測項目包括黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、赭曲霉毒素、伏馬菌素、T-2毒素等；

6、儀器檢測響應時間小于8秒，定量檢測結果顯示與液晶屏上，顯示的結果包括項目名稱、濃度、陰陽性判斷，參考范圍等；

7、可通過內(nèi)置熱敏打印機，也可通過RS232、USB接口傳輸?shù)诫娔X，還可通過WIFI無線模塊實現(xiàn)數(shù)據(jù)的遠程傳輸，實現(xiàn)檢測數(shù)據(jù)和信息的溯源管理及大數(shù)據(jù)分析；

8、可存儲記錄檢測時間，樣品編號，產(chǎn)品批次、檢測值、陰陽性判斷等多種信息，數(shù)據(jù)儲存≥10000條；

9、可根據(jù)日期、檢測項目進行檢索；

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